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1、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養的適宜溫度是37~38℃，溫度過高或過低都會影響到細胞的生長。

2、滲透壓：細胞在高滲透溶液中低滲溶液中，可以立即發生皺縮或腫脹、破裂。所以，滲透壓是體外細胞培養的重要條件之一。

3、氣體環境和PH值：體外培植細胞需要理想的氣體環境，氧和二氧化碳石細胞生存必需的條件之一。

4、無毒和無菌：無毒和無菌是體外培養細胞的首要環境條件。

5、輻射線和超聲波 
    ① 可見光：波長是390~780nm。可見光的各種有色光能引起細胞退變，延長核分裂的間期，還可顯著降低細胞的附壁能力。因此，體外培養細胞應避免日光直接照射，在黑暗中進行培養或短期存放。
    ② 紫外線：弱紫外線下耐受能力強的細胞變化不大，但對敏感的細胞有損害。
    ③ 放射線：X射線對細胞有明顯損傷，B射線可影響細胞核的分裂，R射線使核分裂數減少并出現不正常的核分裂，可使細胞死亡。

4、超聲波
    在超聲波振動下，細胞很快會破裂，開始是胞質發生紊亂的流動，原生質膠體結構也有明顯變化，若停止超聲波振動可恢復。細胞致死的原因是由于產生空化作用所致，當超聲波在2.5W/c㎡時，細胞受損，染色體發生畸變，首先發生畸變的是核染色體。

6、細胞接種密度
    在體外培養細胞中，細胞接種數對細胞的生長有影響，適宜的接種密度，可以促使細胞增殖，接種密度太低或太高都不利于細胞的生長增殖。

7、容器轉動速度和懸浮攪動速度
    有時為了研究的需要而將培養細胞在容器中進行旋轉或攪動，如貼壁細胞在旋轉管中培養，使轉鼓的轉速提高，細胞增殖率隨之提高。其原因可能是轉動使足夠的營養物質流動和較充分的氧化作用之故。