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大鼠纖維介素蛋白(fgl2)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

閱讀:1316          發布時間:2016-1-27
提 供 商 上海恒遠生物科技有限公司 資料大小 147KB
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本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T     6.0ng/L - 180ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中纖維介素蛋白(fgl2)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠纖維介素蛋白(fgl2)水平。用純化的大鼠纖維介素蛋白(fgl2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入纖維介素蛋白(fgl2),再與HRP 標記的纖維介素蛋白(fgl2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維介素蛋白(fgl2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠纖維介素蛋白(fgl2)濃度。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
180ng/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
90ng/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
45ng/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
22.5ng/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
11.25ng/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月

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