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ELISA捕獲包被法檢測抗體原理及其簡單步驟
閱讀：4118 發(fā)布時間：2019-8-1做實驗的時候你知道ELISA捕獲包被法檢測抗體原理和步驟嗎，上海恒遠生物科技有限公司來告訴你。
一、原理
捕獲包被法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。以目前常用的IgM測定為例，因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在，則后者可干擾IgM的測定。因此先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于傳染病的早期診斷中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類風(fēng)濕因子（RF）同樣能干擾捕獲包被法測定IgM抗體，導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
捕獲法測抗體的簡要操作步驟：
1.特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性結(jié)合待測抗原的抗體固定于固相載體表面；
2.加入待測樣品，通過固定在載體表面的針對該抗原的抗體固定于載體表面；
3.加入特異性抗原以及針對該特異性抗原的酶標抗體；
4.加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
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