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恒遠(yuǎn)公布白介素6(IL-6)的誘生條件及原理
閱讀:2625 發(fā)布時(shí)間:2013-6-3
白介素6(IL-6)的誘生
IL-6來(lái)源于單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、骨肉瘤細(xì)胞等。IL-6是B細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中起調(diào)節(jié)作用和誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌的必需因子之一。【結(jié)果判斷】1. 多發(fā)性硬化(MS)患者腦脊液中IL-6水平明顯升高,且與腦脊液中的細(xì)胞數(shù)、總蛋白、IgG均有顯著相關(guān)。
ID6由多種淋巴類和非淋巴類細(xì)胞產(chǎn)生,具有多種生物學(xué)功能,在機(jī)體的免疫應(yīng)答、骨髓造血及炎癥反應(yīng)中均起重要作用。
機(jī)體多種組織細(xì)胞如單核一巨噬細(xì)胞、T、B淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞系均可產(chǎn)生IL-6(一些患者血清中也含有IL-6),可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇。
1.天然樣品 人血清經(jīng)56~C30min滅活后可用于檢測(cè)IL-6:
2.PHA誘導(dǎo)人外周血淋巴細(xì)胞 PHA刺激人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)3d后,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清。
3.LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 將小鼠腹腔巨噬細(xì)胞調(diào)整成2X106/mL,加人終濃度為20ug/mL的LPS,培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清。
4.小鼠脾淋巴細(xì)胞 將小鼠脾淋巴細(xì)胞調(diào)整成5X106/mL,培養(yǎng)24h后,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清。小鼠脾細(xì)胞可自發(fā)產(chǎn)生IL-6,或加入終濃度為3ug/mL的ConA作為誘生劑。
概述
白細(xì)胞介素或白介素(interleukin,IL)是一組細(xì)胞因子(分泌的信號(hào)分子)。zui早發(fā)現(xiàn)在白細(xì)胞中表達(dá)作為細(xì)胞間信號(hào)傳遞的手段。實(shí)際上,白細(xì)胞介素可以由多種細(xì)胞產(chǎn)生。免疫系統(tǒng)的功能,在很大程度上依賴于白細(xì)胞介素。一些罕見(jiàn)的白細(xì)胞介素缺陷不足都常出現(xiàn)自身免疫性疾病或免疫缺陷。IL-6是一種分子量為26kD的蛋白質(zhì),由184個(gè)氨基酸組成。zui初人們只發(fā)現(xiàn)其在白細(xì)胞中合成并在白細(xì)胞間發(fā)揮作用而命名。隨研究的不斷進(jìn)展,人們逐漸發(fā)現(xiàn)不僅激活的淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞可以合成和分泌IL-6,而且骨髓細(xì)胞和部分腫瘤細(xì)胞等也可以產(chǎn)生IL-6。其作為一種機(jī)體在免疫應(yīng)答中產(chǎn)生的重要介質(zhì),具有多種生物學(xué)活性。IL-6是一種多效性細(xì)胞因子,能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能,包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、免疫防御機(jī)制及血細(xì)胞生成等。IL-6與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,它通過(guò)干預(yù)細(xì)胞的黏附性 和活動(dòng)力、血栓形成、腫瘤特異性抗原的表達(dá)及腫瘤細(xì)胞的增殖,從而影響腫瘤的進(jìn)展。它還能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能,包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、免疫防御機(jī)制及血細(xì)胞生成等。實(shí)驗(yàn)原理 用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗IL-6抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗IL-6抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-6呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
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