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我司王總全新講解:ELISA試劑盒包被方式

閱讀:1462          發(fā)布時間:2015-3-18

根據(jù)上海生物技術部分享出Elisa試劑盒的包被方式,我司王總結合客戶實際將Elisa試劑盒的包被方式進行詳細總結,供客戶參考!歡迎廣大用戶技術服務。

試劑盒的包被用抗原用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等,須經(jīng)提取純化才能作包被用。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上,抗體結合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法(見2.2.4),試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

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