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平端DNA連接的優(yōu)缺點(diǎn)

閱讀:392發(fā)布時(shí)間:2016-8-5

ELISA試劑盒T4噬菌體dna連接酶不同于大腸桿菌DNA連接酶,它可以催化平端DNA片段的連接(Sgaramella和 Khorana,1972;Sgaramella和Ehrlich,1978),由于DNA很容易成為平端,所以這是一個(gè)極為有用的酶學(xué)物性。有了這樣的物性,才能使任何DNA分子彼此相連。

優(yōu)點(diǎn):1、沒有連不上的,只有切不開的。平末端連接不牽扯到粘性末端的堿基突出問題,所以,理論上任何兩條DNA序列都能連接在一起,當(dāng)然需要 ligase的酶學(xué)作用。這個(gè)不同DNA分子之間的連接帶來了極大地便利,因?yàn)槠侥┒俗匀皇沁@樣,而如果遇到5‘或者3’突出的粘性末端,也可以經(jīng)過處理成為平末端。

2、有時(shí)候,兩個(gè)平末端連接在一起以后,可以產(chǎn)生另一種內(nèi)切酶的識(shí)別序列,為后續(xù)的克隆工作提供了一種機(jī)會(huì)。

缺點(diǎn):1、連接效率比粘性末端低:連接效率之所以比較低,原因之一是在連接過程中只有連接酶的作用,缺乏粘性末端那樣突出堿基的互補(bǔ)作用;原因之二是常用的T4DNAligase對(duì)于平末端的Km值比粘性末端高1000倍。

2、可能產(chǎn)生雙向插入:由于平端連接的末端沒有特異性,連接的時(shí)候不能定向,所以兩種方向的插入都有可能。這個(gè)時(shí)候就需要有一種有效的鑒定方法。一般分別在載體和目的片段選擇一個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行酶切鑒定,當(dāng)然,具體的鑒定方法要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)而定。ELISA試劑盒

3、可能多拷貝插入:平端連接時(shí),可能目的片段多個(gè)插入,并且在多個(gè)插入的時(shí)候還有可能每個(gè)插入子以不同方向連接,導(dǎo)致有時(shí)候結(jié)果難以解釋。一般目的片段越大,多拷貝插入的可能就越小。

Monoamine oxidase A+B    單氨氧化酶A+B抗體
MIR16    膜蛋白相互作用蛋白R(shí)GS16抗體
Matriptase 2    膜型*蛋白酶2抗體
MRP8+MRP14    多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體
MOBKL2B    Mob1同源蛋白MOBKL2B抗體
MOBKL2C    Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體
MEGF5    復(fù)合型表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
MYLIP    低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白抗體
ZNF144    鋅指蛋白144抗體
MYF5    生肌決定因子Myf5抗體

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