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閱讀:577發(fā)布時間:2017-2-10
進(jìn)口ELISA試劑盒價格腺苷脫氨酶(adenosinedeaminaseADA)是嘌呤核苷代謝中重要的酶類,屬于巰基酶,每分子至少含2個活性巰基,其活性能對氯汞甲酸*抑制。近十幾年來,隨著對ADA的深入研究,檢測方法也不斷發(fā)展。目前已發(fā)展了四代。
*代
ADA測試:ADA將腺苷 脫氨產(chǎn)生*和氨。一個ADA活性單位在測試特定條件下每分鐘脫氨1μmole腺苷成為*。通過動態(tài)測量腺苷265nm處吸光度下降的速度,可以測算ADA的活性大小。Kaplan法 (1955) 由此建立。由于高底物濃度造成吸光度過高,該法僅適用于腺苷濃度低于40μM。如此低的底物濃度達(dá)不到底物飽和要求,造成ADA活性檢測失真。因此,該法不適用于臨床應(yīng)用。
第二代
ADA測試:原理為腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷水解,產(chǎn)生*和氨。然后用Berthelot顯色反應(yīng)(1859)測定反應(yīng)過程中產(chǎn)生氨的量,從而計算血清ADA活性單位。所需試劑易配制,儀器簡單,但靈敏度低,易受外源性NH3影響,空白過高,不能直接測定紅細(xì)胞ADA活性。
同樣原因,ADA偶聯(lián)*脫氫酶(GLDH)反應(yīng):通過測量340nm處NADPH吸光度下降的速度來測算ADA活性。該法也因血清含氨干擾,以及測試系統(tǒng)中過高NADPH造成非特異性氧化而無成算。
第三代
ADA測試:Kalckar氏應(yīng)用ADA偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶 和黃嘌呤氧化酶 反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法。通過測量293nm處尿酸鹽吸光度上升的速度來測算ADA活性。但是,293nm時血清吸光度太高,造成臨床應(yīng)用不便。
第四代
ADA測試:通過ADA偶聯(lián)PNP,XOD,過氧化氫酶和醛脫氫酶,借助過氧化氫(H2O2)反應(yīng)測量334nm處NADPH吸光度上升的速率來測算ADA活性。該法克服了以往ADA測試的困難,然而,鑒于試劑成本高,阻礙實際臨床使用。對第四代測試方法的改進(jìn)為偶聯(lián)PNP,XOD和過氧化物酶反應(yīng)。ADA酶解腺苷脫氨產(chǎn)生*;再通過PNP的作用,生成次黃嘌呤;后者在XOD氧化下生成尿酸和過氧化氫(H2O2);zui后在POD的作用下H2O2再與N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline (EHSPT)、4-氨基*(4-aminoantipyrine,4-AA)反應(yīng)(Trinder氏反應(yīng)),生成紫紅色的有色醌(Quinone dye)。
進(jìn)口ELISA試劑盒價格通過動態(tài)測量有色醌550nm處吸光度上升的速度來測算ADA的活性。從反應(yīng)原理可知NH4+對該法無影響。其原理反應(yīng)方程式如下:反應(yīng)具有測定精密度高,抗*力強,適合自動化快速測定的特點,為臨床常規(guī)開展ADA檢測應(yīng)用創(chuàng)造了有利條件。
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