進(jìn)口ELISA試劑盒價格檢測步驟：
1. 制備含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝膠：推薦分離膠濃度為8%。按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備SDSPAGE凝膠。將10 × substrate G 融化，并90 ºC 加熱5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加入10 × substrate G 并使之稀釋10 倍，混勻后加入過硫酸銨和TEMED，等待凝膠聚合。
2. 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer （用完后可自行配制：4% SDS, 100 mMTris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue），混合后直接上樣。切勿加熱變性，并且僅使用不加還原劑的上樣緩沖液。可通過預(yù)試驗確定加樣量，使用普通蛋白預(yù)染Marker 即可。陽性對照（可選步驟）：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl 全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducingbuffer 等體積混合，取5-15μl 上樣。
3. 低電流恒流電泳，每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍(lán)跑出凝膠前沿時結(jié)束電泳。
4. 洗滌凝膠：取出凝膠，去除濃縮膠，放入容器內(nèi)。可先用適量蒸餾水沖洗凝膠，然后加入10 ml1× Buffer A（用蒸餾水稀釋），室溫漂洗凝膠2 × 30 分鐘。中間換液。
5. 孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B（蒸餾水稀釋），室溫或37ºC 孵育1~5 小時。陽性對照或者血中的MMP 通常37ºC 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低，應(yīng)延長孵育時間為10 小時或過夜。
6. 顯色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液（操作步驟見SDS-PAGE凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液說明書）。凝膠的大部分區(qū)域被深染，在有MMP 條帶的位置不被染色而形成透亮區(qū)域。透明區(qū)域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置（酶譜）及活性。陽性對照將在66~72 （MMP-2）、92 （MMP-9）、130 （proMMP-9）、225 （proMMP-9） kDa位置出現(xiàn)透明條帶。
7. 條帶掃描：將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP 條帶透明，但凝膠背景并非真正全黑。解決辦法：可用非透射光掃描，或用軟件圖像處理程序調(diào)整背景顯示為灰度顯示，并盡量設(shè)置為黑色。明膠酶譜法試劑盒MMP 條帶則為白色，這種背景黑條帶白的格式是英文論文中zui常見的格式。
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