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ELISA細胞制備及轉化中的影響要素

閱讀:82發布時間:2016-7-21

⑴、細胞的成長狀況和密度ELISA試劑盒
從-70℃或-20℃甘油保留的菌種中直接轉接用于制備感受態細胞的菌液。不要用已
通過多次轉接,及貯存在4℃的培養菌液。細胞成長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個擺布為佳。即使用對數期或對數成長前期的細菌,可通過測定培養液的OD600控制。對TG1菌株,OD600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml擺布。(應留意OD600值與細胞數之間的隨菌株的不一樣而不一樣)。密度過高或不足均會使轉化率下降。
此外,受體細胞通常應是約束-潤飾體系缺陷的驟變株,即不含約束性內切酶和甲基化酶的驟變株。而且受體細胞還應與所轉化的載體性質相匹配。
⑵、質粒dna的質量和濃度
用于轉化的質粒DNA應主要是超螺旋態的,轉化率與外源DNA的濃度在必定范圍內成正比,但當參加的外源DNA的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。通常地,DNA溶液的體積不該超越感受態細胞體積的5%,1ng的cccDNA即可使50ul的感受態細胞到達飽和。
關于以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化功率低,試驗證實,大于30kb的重組質粒將很難進行轉化。此外,重組DNA分子的構型與轉化功率也密切相關,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,因而重組DNA大都構成環狀雙螺旋分子。
⑶、試劑的質量
所用的CaCl2等試劑均需是zui高純度的,并用zui純凈的水配制,分裝保留于4℃。
⑷、避免雜菌和雜DNA的污染
全部操作過程均應在無菌條件下進行,所用器皿,如離心管,移液槍*是新的,并經高壓滅菌處理。一切的試劑都要滅菌,且留意避免被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染,不然均會影響轉化功率或雜DNA的轉入。
⑸、全部操作均需在冰上進行,不能脫離冰浴,不然細胞轉化率將會下降。

CDKN2B    細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體
CRIPTO    畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體
CHFR    泛素連接酶蛋白CHFR抗體
Cullin 1    Cullin1抗體
Cofilin    肌動蛋白結合蛋白CFL抗體
CDMP1    軟骨衍生形態發生蛋白1抗體
Beta-casein    β-酪蛋白抗體
c21orf63     21號染色體開放閱讀框63抗體
C4orf52    4號染色體開放閱讀框52抗體
C4orf40    4號染色體開放閱讀框40抗體
Cullin 3    Cullin3抗體
CDC40    細胞分裂周期同源蛋白40抗體
CCDC106    卷曲螺旋結構域蛋白106抗體

ELISA試劑盒


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