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培養細胞時常見的問題及解決方法

閱讀:240發布時間:2014-9-26

培養細胞時常見的問題及解決方法:

  1、如何選用特殊細胞系培養基?  

    培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。  

2、何時須更換培養基?  

    視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數據上之更換時間,按時更換培養基即可。  

3、可否使用與原先培養條件不同之培養基?  

    不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基, 若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。  

4、可否使用與原先培養條件不同之血清種類?  

    不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生*的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。  

5、何謂FBS, FCS, CS, HS ? 

     FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯誤的使用字眼, 請不要再使用。 CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。  

6、培養細胞時應使用5 % 或10% CO2?或根本沒有影響?  

    一 般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統, 而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培 養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養時應使用10 % CO2;當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時, 則應使用 5 % CO2 培養細胞。  

7、Hank's *(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養箱。原因是什么?

    Hank's *(HBS)和Earle's*(EBS)有什么本質的功能差別?  HBS 和 EBS 的主要差別在于*的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。*需用高水平的CO2 平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組 織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。  

8、細胞之接種密度為何?  

    依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。 


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