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上海撫生實業(yè)有限公司
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全程ELISA實驗技術指導，犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit免費代做實驗（從標本收集、保存、預試驗、實驗、數據分析等全實驗過程提供完整的技術指導。）
犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit Canine Tumor necrosis factor α，TNFα ELISA Kit
Tumor necrosis factor α，TNFα，腫瘤壞死因子α。TNFα前體是以跨膜蛋白的形式存在于細胞內，在細胞外被剪切成17KDa的成熟形態(tài)（157個氨基酸）。活性的TNFα以非共價鍵二聚體、三聚體甚至五聚體的形式存在，但在SDS-PAGE顯示為單一17KDa條帶。很多細胞都能合成TNFα，包括各種免疫細胞（單核細胞、巨噬細胞、T、B細胞、粒細胞、NK細胞）和非免疫細胞（上皮細胞、纖維細胞、肌細胞、Kuppfer細胞等）。TNFα的合成受到很多因素的影響。其生理功能早認為是有抗腫瘤活性，現在已明確不僅能調節(jié)腫瘤細胞的生長，對很多細胞的生長、分化和代謝都有影響。TNFα是免疫宿主反應的快速反應因子。其另一特點是在免疫疾病中病理性作用。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經*（biotin）標記。樣品和*標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit操作流程示意：
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上海撫生“質量是企業(yè)是生命之源”，選購犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit優(yōu)勢如下：
1）*抗體——高效、靈敏、特異
2）規(guī)范包被操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3）*的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4）適用于體液、組織勻漿，細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5）可檢測指標齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
試劑和樣本的控制方法：
一、犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照國家標準進行，已獲得國家承認的“三證”，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit樣本
1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解
操作步驟：
1、犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數倍。
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9.在確保酶標板底無水滴及孔內無氣泡后，立即用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度 （O.D. 值）。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
12、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
以下是犬腫瘤壞死因子α（TNFα）Elisa Kit的詳細介紹，點擊了解更多其它 ELISA Kit。
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