細(xì)胞凍存的步驟是什么?

2021年07月20日 10:48通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：7060

　　細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。

　　細(xì)胞凍存的步驟：

　　1、選擇活力好，密度約80%的細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，比較適合凍存。細(xì)胞凍存依舊分為貼壁細(xì)胞凍存和懸浮細(xì)胞凍存。

　　2、顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),若細(xì)胞密度較高，培養(yǎng)基變黃，需要換液4h之后再進(jìn)行凍存操作，細(xì)胞長(zhǎng)滿后，將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基用槍小心的吸去。再用PBS沖洗一到兩次,盡量吸干凈潤(rùn)洗的PBS，加入胰酶消化細(xì)胞,消化一定要注意控制胰酶作用時(shí)間，消化細(xì)胞時(shí)由于每個(gè)細(xì)胞貼壁性不一樣，消化時(shí)間差別會(huì)很大,胰酶消化是需要比較精細(xì)的操作，既要充分消化下細(xì)胞打散成單細(xì)胞懸液，均勻接種，又要避免消化過(guò)度造成細(xì)胞嚴(yán)重受損。大家用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，所以不能*規(guī)定消化時(shí)間，一般儀個(gè)人經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。

　　對(duì)于消化這步，建議按照下述操作：胰酶首先復(fù)溫到室溫后加入細(xì)胞，放入37℃培養(yǎng)箱，然后每隔30秒，吹打下細(xì)胞，如果能夠吹打散細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞消化完成可以終止消化，之后混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡。如果30秒不能分散，則再等30秒重復(fù)操作。

　　3、消化完成后加6-8ML*培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液。

　　4、900-1000rpm離心3分鐘，棄上清,加入配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml,在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間及操作者,裝有細(xì)胞的凍存管放入-4℃冰箱10分鐘，然后放入-80℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

　　5、24小時(shí)后取出一只凍存管復(fù)蘇，檢查活性及是否污染。

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