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2025年03月09日 14:34通派(上海)生物科技有限公司點擊量:50
細胞:Capan-1細胞
中文名稱:人胰腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:IMDM+20%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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Ser294的磷酸化對PI4KIIIβ功能有什么作用?
磷酸化位點的突變使得PI4KIIIβ的脂激酶活性降低了60%。另外,與激酶失活的PKD突變體的顯性失活效應(yīng)相統(tǒng)一的,過量表達激酶死亡PKD1降低了PI4KIIIβ的脂激酶活性。
突變也降低了熒光標記的分泌型蛋白質(zhì)從TGN到細胞表面的運輸效率。PI4KIII的過量表達增加了標記蛋白到達細胞表面的數(shù)量。
總結(jié)起來,這些結(jié)果表明蛋白激酶和脂激酶對于分泌型蛋白運輸過程都非常重要。
科研人員認為,PKD在TGN的功能就像是“瓶頸”一樣進行調(diào)控:通過促使參與載體囊泡形成的蛋白質(zhì)磷酸化,來控制分泌型分子的運輸。
PI4KIIIβ是這些底物中的一員,通過PKD介導的磷酸化增強了它的脂激酶活性。這個過程進而增加了TGN膜中的PI(4)P數(shù)量。
因為PI(4)P數(shù)量和膜結(jié)合的ADP-核糖基化因子,被認為是介導載體囊泡形成的重要成員。接下來,對于研究者們的挑戰(zhàn)將會是闡明載體囊泡形成的精確機制。
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