沉淀型單組分TMB底物溶液使用說明

2025年05月08日 16:45南京信帆生物技術(shù)有限公司點擊量：45

沉淀型單組分TMB底物溶液使用說明

產(chǎn)品簡介:

TMB（四甲基聯(lián)苯胺；3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是檢測

辣根過氧化物酶（HRP）的靈敏顯色底物之一。我公司研究開發(fā)的沉淀型單組份

TMB顯色底物液，適用于檢測膜上蛋白質(zhì)的免疫學實驗結(jié)果顯示。本產(chǎn)品主要由

TMB和優(yōu)化的反應緩沖液組成。免疫反應固定的HRP可催化本產(chǎn)品形成不溶性的

藍色絡合物，并沉淀結(jié)合在膜上，顯示目的蛋白的位置及表達量。

適用范圍:

Western Blot

其它通過沉淀反應檢測HRP的應用

主要成分：

產(chǎn)品使用說明:

本說明書是沉淀型單組分TMB底物溶液的一般使用說明，每個系統(tǒng)根據(jù)經(jīng)驗來優(yōu)化。

注意：

1、顯色時間過長可能導致底物沉淀從膜上脫落或背景加深。

2、顏色變化的快慢很大程度上取決于蛋白量、抗體使用量以及所使用的封閉液種類等。

1. TMB

2. H2O2及特殊的穩(wěn)定劑

3. 導致TMB反應產(chǎn)物沉淀的特制化合物

自備溶液

PBS-T：PBS中含0.05%的Tween-20。

Western Blot膜封閉液

以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的一抗。每個系統(tǒng)一抗的最佳稀釋比率根據(jù)經(jīng)驗來決定。

以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的HRP標記的二抗。每個系統(tǒng)二抗的最佳稀釋比率根

據(jù)經(jīng)驗來決定。

操作步驟

1. 將膜從轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)中取出后在封閉液中室溫搖動封閉30~60分鐘。

2. 加一抗室溫搖動孵育1~2小時。

3. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。

4. 加HRP標記的二抗室溫搖動孵育1小時。

5. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。

6. 將膜浸入沉淀型單組分TMB底物溶液中，反應2－30分鐘（根據(jù)顏色變化

掌握染色時間）。

7. 顯色完成后，用蒸餾水沖洗可終止顯色反應。

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