注意事項(xiàng)：
* 全程佩戴一次性手套。皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來(lái)源。培養(yǎng)良好的微生物實(shí)驗(yàn)操作習(xí)慣預(yù)防微生物污染。
* 使用滅菌的，一次性的塑料器皿和自動(dòng)吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導(dǎo)致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探針的實(shí)驗(yàn)室可能用rna酶a 或T1來(lái)降低濾紙上的背景，因而某些非一次性的物品（如自動(dòng)吸管）可能富含RNA酶。
* 在TRIZOL 中，RNA 是隔離在RNA 酶污染之外的。而對(duì)樣品的后續(xù)操作會(huì)要求用無(wú)RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C 的烘箱中烘烤4 小時(shí)。塑料器皿可以在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，用水*漂洗干凈后高壓滅菌備用。
抽提步驟：
1．勻漿化作用
通過(guò)離心來(lái)沉淀細(xì)胞后，棄上清，用移液管加TRIZOL試劑反復(fù)吹打來(lái)裂解細(xì)胞至均一通亮的液態(tài)后，將勻漿樣品在15—30°C 條件下孵育5 分鐘以使核蛋白體*分解。
（每5—10×106的動(dòng)物細(xì)胞，植物或酵母菌細(xì)胞或每1×107 細(xì)菌加1ml的TRIZOL。在加入TRIZOL前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞因?yàn)槟菢訒?huì)增加mRNA降解的可能性。）
2．分離階段
每1 mlTRIZOL 加0.2 ml 氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15 秒并將其在30°C 下孵育2—3 分鐘。在2—8°C 下以不超過(guò)12,000×g 的離心力高速冷凍離心15 分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色的苯酚-氯仿層，中間層，上層無(wú)色的水樣層。RNA 無(wú)一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為所加TRIZOL 容量的60%
3．RNA的沉淀
將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的試管中，通過(guò)將水樣層和異丙醇混合來(lái)沉淀RNA。zui初均化時(shí)的每1 mlTRIZOL 對(duì)應(yīng)0.5 ml 異丙醇。將混合的樣品在15—30°C 條件下孵育10 分鐘并在2—8°C 下以不超過(guò)12,000×g 的離心力高速冷凍離心10 分鐘。RNA沉淀在離心前通常不可見(jiàn)，形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。（如果希望分離DNA 和蛋白，有機(jī)層同樣要予以保留。在除去水樣層后，樣品中的DNA 和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。共純化DNA 對(duì)于樣品間標(biāo)準(zhǔn)化RNA 的產(chǎn)量十分有用。）
4．RNA的洗脫
移去上層懸液。用75%的乙醇洗滌RNA 沉淀一次，每1 ml 的TRIZOL 至少加1 ml 的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2—8°C 下以不超過(guò)7,500×g的離心力高速冷凍離心5 分鐘。
5．RNA的再溶解
在操作的zui后，簡(jiǎn)單干燥RNA沉淀。尤為重要的是，不能讓RNA沉淀*干燥那樣會(huì)極大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA樣品其A 260/280 比值< 1.6。用移液管尖分幾次移取無(wú)RNA酶的水或0.5% SDS溶液來(lái)溶解RNA，并在55—60°C下孵育10 分鐘。