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上海士鋒生物科技有限公司
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植物組織總RNA的制備:Trizol法

時間:2015-11-10閱讀:481
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一、材料、試劑和儀器

1 材料 植物根或葉
2 試劑
1) Trizol試劑(含酚、異硫氰酸胍和溶解劑等)
2)75%乙醇:用DEPC處理水配制75%乙醇,(用高溫滅菌器皿配制),然后裝入高溫烘烤的玻璃瓶中,存放于低溫冰箱。
3 儀器 水浴鍋,低溫高速離心機

二、實驗程序

1 將組織在液氮中磨成粉末后,再以50-100 mg組織加入1mL Trizol液,注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10% 。
2 研磨液室溫放置5min,然后以每1mL Trizol液加入0.2 mL的比例加入氯仿,蓋緊離心管,用手劇烈搖蕩離心管15sec。
3 12000g 離心10min,取上層水相于一新的離心管,按每mL Trizol液加0.5 mL異丙醇的比例加入異丙醇,室溫放置10min,12000g 離心10min。
4 棄去上清液,按每mL Trizol液加入至少1mL的比例加入75%乙醇,渦旋混勻,4℃下7500g離心5min。
5 小心棄去上清液,然后室溫或真空干燥5-10min,注意不要干燥過分,否則會降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中,必要時可55℃-60℃助溶 10min。RNA可進行mRNA分離,或貯存于70%乙醇中于-70℃保存。

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