胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經分散接種之手段稱為傳代。凡能經傳代方式進行再次培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經大量擴增后所形成的生物學特性穩(wěn)定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術是從事細胞培養(yǎng)工作的基礎，只有熟悉和掌握了基本技術，才可能更快捷地學習和掌握其他方法，本章重點敘述常用的基本技術。

*節(jié) 原代細胞的取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的*步，若取材不當，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將取材的基本要求和注意事項敘述如下：

一、取材的基本要求

（1）取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養(yǎng)成功，取材時應盡量在4~6h內能制作成細胞，盡快入箱培養(yǎng)，若不能即時培養(yǎng)，應將組織浸泡于培養(yǎng)液內，于4℃存放。若組織塊較大，應在清除表面血塊、壞死組織、脂肪和結締組織后，切碎于培養(yǎng)液內4℃存放，但時間不能超過24h.對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基，按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。

（2）取材應嚴格無菌 所取標本材料應在無菌條件下進行，為了確保無菌，對所取材料若疑有污染的可能，應將所取組織在含高濃度抗菌素（400單位/mL）甚至加入適量的兩性霉素B或10%達克寧液的培養(yǎng)液內于4℃下存放2小時以上，再用PBS洗2~3次，以確保所取材料無菌。要用無菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養(yǎng)液（內含400單位/mL抗菌素）的小瓶等便于攜帶的物品來取材，所取材料應避免接觸有毒有害的化學物質，如碘、汞等。

（3）取材和原代細胞制作時，要用鋒利的器械，如手術刀或剃須刀片切碎組織，盡可能減少對細胞的機械損傷。

（4）要仔細去除所取材料上的血液（血塊）、脂肪、壞死組織及結締組織，切碎組織時應避免組織干燥，可在含少量培養(yǎng)液的器皿中進行。

（5）取材應注意組織類型、分化程度、年齡等，一般來講，胚胎組織較成熟個體組織容易培養(yǎng)，分化低的較分化高的組織容易生長，腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。取材時應盡量選用易培養(yǎng)的組織進行培養(yǎng)。

（6）原代細胞取材時要同時留好組織學標本和電鏡標本。對組織的來源、部位、包括供體的一般情況要做詳細的記錄，以備以后查詢。

二、各類組織的取材技術

（一） 皮膚和粘膜的取材

皮膚和粘膜是上皮細胞培養(yǎng)的重要組織來源，主要取自于手術過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術操作，但面積一般2~4cm2即可，這樣局部*痕，若對燒傷皮膚進行上皮細胞膜片移植，可從大腿或臀部取較大皮片，可取2~4cm2皮片，但取材時不要用碘酒消毒；若培養(yǎng)上皮細胞，取材時不要切取太厚，盡可能去除所攜帶的皮下或粘膜下組織；若欲培養(yǎng)成纖維細胞，則反之。皮膚粘膜與外界相通部位，因表面細菌、霉菌很多，取材時應嚴格消毒，必要時要用高濃度抗菌素和適量兩性霉素B漂洗、浸泡。

（二）內臟和實體瘤的取材

內臟除消化道外基本是無菌的，但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位，實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區(qū)域，要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織，否則培養(yǎng)后，由于成纖維細胞的生長給以后的培養(yǎng)工作增加困難。對于一些特殊細胞培養(yǎng)的取材，詳見后面有關章節(jié)。