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【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF參數(shù)說(shuō)明】

中文名：苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF

英文名：Benzamidine Sepharose 4FF

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

基質(zhì)：4%交聯(lián)瓊脂糖

形狀：球形

粒徑：45~165 μm

耐壓：0.3MPa

耐熱：120℃,pH7,水中20min

zui高流速：250cm/h

排阻極限：60000~20×106 (球蛋白)

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF】參數(shù)說(shuō)明_化學(xué)性質(zhì)_操作步驟

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF化學(xué)性質(zhì)】

外觀(guān)：本品為乳白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。

保存：產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇)，通風(fēng)、干燥、清潔的地方;不能冷凍，用過(guò)的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。

保質(zhì)期：暫定5年。

應(yīng)用：本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，具有非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，用于分子量差異大、對(duì)分辨率要求不高的樣品的凝膠色譜純化。

用途：生化研究;巨大分子病毒、疫苗的分離。

化學(xué)穩(wěn)定性：以下溶液中40℃下穩(wěn)定;2mol/L NaOH;70%EtOH;30%異丙醇;30%乙腈;1%SDS;6mol/L鹽酸胍;8mol/L尿素。

性狀：含20%乙醇，底部為乳白色膠體。高度偶聯(lián)的瓊脂糖凝膠，大大加強(qiáng)了機(jī)械性能，快流速;經(jīng)去電核處理，非特異性吸附極低，樣品回收率高;*的化學(xué)穩(wěn)定性，可用多種促溶劑、有機(jī)溶劑操作和1-2M NaOH在位清洗。

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF操作步驟】

1.裝柱：

a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫;配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。

c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡;打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

e、打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定;用2~3柱體積的緩沖液平衡柱子。

2.平衡：

讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變;平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上樣：

a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度;鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

4.洗脫：

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫;加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生：

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗：

a、對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。

b、對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類(lèi)，可用1MNaOH去除。

c、對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類(lèi)等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.去熱源：

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí);或用以下方法步驟去除：

a、2倍柱體積的70%乙醇;

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱體積4M尿素;

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

8.消毒：

用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

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