ELISA試劑盒原理：

1、免疫測定技術的基礎在于ELISA試劑盒抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。

2、ELISA試劑盒特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與ELISA試劑盒有不同結合位點的鼠復合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說(PEI)HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml

3、ELISA試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在ELISA試劑盒，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入ELISA試劑盒底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本ELISA試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

ELISA試劑盒注意事項：

1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但有專業人員進行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。

3、要在實驗前1小時將ELISA試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。

4、實驗時，要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

7、將液體加到ELISA試劑盒孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去

8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

12、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

13、檢測前，要打開ELISA試劑盒，使之穩定10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

15、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。

16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。

17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。

18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。